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人類免疫缺陷病毒檢測試劑臨床試驗注冊審查指導原則（2023年修訂版）
本指導原則旨在指導注冊申請人對人類免疫缺陷病毒檢測試劑臨床試驗的設計及開展，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。
本指導原則是針對人類免疫缺陷病毒檢測試劑臨床評價的一般要求，申請人應依據產品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，并依據產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。
本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規強制執行，如果有能夠滿足相關法規要求的其他方法，也可以采用，但需要詳細闡明理由，并對其科學合理性進行驗證，提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規的前提下使用本指導原則。
本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。
一、適用范圍
人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）檢測試劑是指利用免疫學及分子生物學等方法原理對人血清、血漿或其他體液中的特定的HIV生物學標記物，包括HIV 1型（HIV-1）p24抗原、HIV抗體、HIV核酸等進行定量或定性分析的試劑。
本指導原則適用于利用免疫層析法、化學發光法、時間分辨免疫熒光法、免疫印跡法等免疫學方法對HIV抗原和/或抗體進行定性檢測的體外診斷試劑，以及應用分子生物學方法（如實時熒光聚合酶鏈反應等）對HIV核糖核酸進行定量或定性檢測和分析的體外診斷試劑，適用于首次注冊產品及申請變更注冊的產品。
本指導原則不適用于國家法定血源篩查用HIV檢測試劑。
二、臨床試驗設計
臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應符合相關法規及《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求，如相關法規、文件有更新，臨床試驗應符合更新后的要求。
（一）臨床試驗設計
1.臨床試驗機構及人員
申請人應選擇不少于3家經醫療器械臨床試驗機構備案的臨床機構開展臨床試驗。建議在選擇臨床單位時，綜合流行病學背景、HIV的特性等因素選擇臨床試驗機構，臨床試驗機構的實驗操作人員應熟悉檢測系統的各環節（儀器、試劑、質控及操作程序等），熟悉臨床試驗方案。
2.臨床試驗適用人群和樣本類型
2.1適用人群
對于不同的檢測試劑，其預期用途不同，因此入組人群亦不同。申請人應根據不同的要求入組適用人群開展臨床試驗。
對于HIV抗體檢測、抗原抗體聯合檢測、HIV核酸定性檢測試劑，預期用途為HIV感染的輔助診斷。入組人群應為疑似HIV感染的人群，包括具有HIV相關的癥狀/體征、以及有相關流行病學史的人群。應納入HIV感染的不同進展階段，包括急性期、無癥狀感染期及艾滋病期病例。為考察申報產品的特異度，臨床試驗中還應納入可能會對試劑檢測造成干擾的樣本，如自身免疫病患者、類風濕因子（RF）陽性的病例、孕婦以及其他可能會造成交叉反應的病原體（乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等）感染的病例等。對于HIV抗體檢測第三代發光類試劑,應選擇至少5套經過全面驗證的陽轉血清盤進行檢測，對于抗原抗體聯合檢測第四代發光類試劑，應選擇至少10套經過全面驗證的陽轉血清盤進行檢測，以評價申報產品對于HIV感染早期的檢出能力。對于抗原抗體聯合檢測試劑，為充分評價抗原的檢測性能，應納入至少10例單獨抗原陽性的樣本，如臨床試驗中難以獲得，可使用商業化的血清盤進行檢測。
對于 HIV RNA定量檢測試劑，預期用途為通過對患者血清或血漿中人類免疫缺陷病毒核酸基線水平和變化情況的監測，用于評估抗病毒治療的應答和治療效果。入組人群應以已確診HIV感染的病例為主，應包括正在接受抗病毒治療的患者以及未接受抗病毒治療的患者，確保樣本HIV病毒載量覆蓋申報產品的線性范圍。同時應入組一部分陰性病例來考察其檢測的特異度。如此類試劑預期用途除用于治療監測外，還可用于HIV感染的輔助診斷，則還應按照上述關于輔助診斷預期用途的臨床試驗設計開展相應的臨床評價。
對于HIV抗體檢測試劑（免疫印跡法），預期用途為用于經HIV抗體篩查試驗復檢為有反應性的樣本的確認。入組人群應以HIV抗體篩查試驗復檢為有反應性的病例。為了能夠考察確證試劑的特異度，臨床試驗中應納入一定數量的經確證試劑檢測為陰性的人群。
我國境內流行的HIV主要為HIV-1型M組，其常見的基因型主要為B/B’、BC重組型（包括CRF 07_BC重組型和CRF 08_BC重組型）以及AE重組型（CRF 01_AE重組型）。在選擇HIV感染者病例時，首先應根據HIV流行的情況，選擇能代表我國不同地區流行基因型的HIV-1感染者病例，以對試劑檢測我國流行的HIV-1病毒的能力進行客觀科學的評價。抗體檢測試劑以及抗原抗體檢測試劑，常見基因型每種不少于10例。對于核酸檢測試劑，每種常見基因型應至少30例，同時按基因型對樣本進行亞組分析。對于我國境內罕見的基因型（1型O組、2型），也應進行適當驗證，樣本應經過科學的驗證和確認，考慮到此類樣本的不易獲得性，樣本可來源于HIV感染者，也可來源于經過科學驗證的血清盤。
臨床試驗中還應注意納入一定數量的低滴度/弱陽性樣本。
2.2樣本類型
樣本類型一般為血清、血漿。如經臨床前研究證明分析性能沒有差異，例如血清和血漿樣本，則臨床試驗中可進行匯總統計。對于口腔粘膜滲出液、尿液等體液樣本，應單獨進行臨床評價。
臨床樣本的處理、保存和核酸提取等應分別滿足申報產品說明書及對比試劑說明書的相關要求。
3.對比方法的選擇
對于已有已上市同類產品的試劑，可選擇境內已批準上市、臨床普遍認為質量較好的同類產品作為對比試劑，采用試驗體外診斷試劑與之進行對比試驗研究，考察申報產品與對比試劑的一致性。對比試劑的選擇應從預期用途、樣本要求、檢測性能等方面，確認其與申報產品具有較好的可比性。
對于無已上市同類產品的新HIV檢測試劑，應采用試驗體外診斷試劑與臨床參考標準進行比較研究。臨床參考標準即參照臨床公認的臨床診療指南、艾滋病診斷標準等進行病例診斷的方法。對于核酸定量檢測試劑同時還應對其量值與疾病進展狀況、轉歸、治療情況等的相關性進行分析。
對于口腔粘膜滲出液、尿液等體液樣本，無論申報產品采用何種檢驗方法，均應采用來自同一患者的血液樣本進行同源對比試驗。檢測血液樣本用對比試劑的檢測性能應盡量高于申報產品。
4.最低樣本量
臨床試驗樣本量應采用適當的統計學方法進行估算，并詳細描述所使用統計方法及各參數的確定依據。
對于抗體檢測、抗原抗體聯合檢測以及核酸定性檢測試劑，此部分臨床試驗目的為評估兩種檢測方法之間的一致性，因此建議采用單組目標值法公式進行最低樣本量的估算。通過陽性符合率和陰性符合率來分別計算所需陽性樣本和陰性樣本的例數。陽性、陰性符合率的臨床可接受標準（P0）一般建議不低于98%。
公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標準正態分布的分數位，P0為評價指標的臨床可接受標準，PT為申報產品評價指標預期值。
對于核酸定量檢測試劑，也應選擇合適的樣本量估算的方法進行最低樣本量的估算。應注意所納入的臨床樣本應覆蓋申報產品的線性范圍。
5. 統計分析
5.1定性檢測試劑
應選擇合適的統計方法對臨床試驗結果進行統計分析，對于定性檢測的一致性評價，常選擇交叉四格表的形式總結兩種方法的結果，評價指標一般包括陽性符合率/靈敏度、陰性符合率/特異度，Kappa值等，并計算相應的95%置信區間。
對于兩種方法檢測不一致的樣本，應采用臨床參考標準或其他方法再次進行確認或提供臨床診斷資料以進一步明確受試者（采集樣本時）所處的感染狀態，同時結合患者的臨床癥狀/體征對差異原因及可能結果進行分析，從而對申報產品的性能進行客觀科學的評價。
5.2核酸定量檢測試劑
5.2.1應根據臨床試驗數據繪制散點圖，進行相關性分析。
5.2.2采用Bland-Altman法，計算一致性限度，評價兩種檢測結果的一致性。一致性限度應在臨床所能接受的界值范圍內。
5.2.3 采用回歸分析對兩種檢測方法的一致性進行評價。應根據數據分布特點等因素選擇適用的回歸分析方法，如Passing-Bablok回歸、Deming回歸和最小二乘回歸等。回歸分析應重點觀察回歸方程的回歸系數和截距等指標，計算回歸系數和截距的95%置信區間。
5.2.4 選擇交叉四格表的形式總結兩種試劑的定性檢測結果，計算陽性符合率、陰性符合率和總符合率、Kappa值等，并計算相應的95%置信區間。
（二）通用要求
1.臨床試驗方案
臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統計學、臨床醫學、檢驗醫學等多方面考慮，設計科學合理的臨床試驗方案。各臨床試驗機構應執行統一的臨床試驗方案，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床試驗機構的實驗室內并由本實驗室的技術人員操作完成，申請人的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉試驗進程，尤其是數據收集過程。
試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經入選的病例再被排除出臨床試驗都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結果時應采用盲法以保證試驗結果的客觀性。
2.質量控制
臨床試驗開始前，建議進行臨床試驗的預試驗，以熟悉并掌握相關試驗方法的操作、儀器、技術性能等，最大限度控制試驗誤差。整個試驗過程都應處于有效的質量控制下，最大限度保證試驗數據的準確性及精密度。
3.臨床試驗報告
臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數據和統計分析方法，最后得出臨床試驗結論。
三、參考文獻
[1]國家市場監督管理總局.體外診斷試劑注冊與備案管理辦法:國家市場監督管理總局令第48號[Z].
[2]國家藥品監督管理局.關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告:國家藥品監督管理局公告2021年第122號[Z].
[3]國家藥品監督管理局.體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則:國家藥品監督管理局2021年第72號[Z].
[4]國家藥品監督管理局.體外診斷試劑臨床試驗報告范本:國家藥品監督管理局2022年第21號[Z].
[5]原國家食品藥品監督管理總局.體外診斷試劑說明書編寫指導原則:原國家食品藥品監督管理總局公告2014年第17號[Z].
[6]WS-293-2019,艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準 [S].
[7]中華醫學會感染病學分會艾滋病丙型肝炎學組 中國疾病預防控制中心.中國艾滋病診療指南（2021版）[J],中國艾滋病性病, 2021,27(11):1182-1201.
[8]中國疾病預防控制中心.全國艾滋病檢測技術規范（2020年修訂版）[Z].
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